Turinys
Tyrimams su mikrobų kultūromis dažnai reikia nustatyti jose esančius organizmus. Kai į agarą, kuriame yra maistinė terpė, įdedama nedidelė kultūros dalis, galima atskirti bakterijų masę į atskirus kolonijas sudarančius vienetus. Kiekvienas iš šių vienetų vystosi atskirose kolonijose, kurios pasižymi savybėmis, kurios padeda identifikuoti organizmą.
Tikslas
Mikrobiologijos tyrimams atlikti reikia ištirti tam tikrų organizmų morfologiją. Kai kuriais atvejais, prieš juos analizuojant, mišrioje kultūroje esantys organizmai turi būti atskirti. Taigi svarbu šias mikrobų kolonijas izoliuoti. Bakterijų kultūrose viename laše yra daug ląstelių. Sėjant išeikvojus ant agaro plokštelės, jie praskiedžiami, todėl atskiroje plokštelės vietoje nusėda viena bakterinė ląstelė. Kelias iš šių atskirų ląstelių skiria keli milimetrai. Kiekviena iš jų dalijasi, kad susidarytų tūkstančiai naujų ląstelių, ir atsirastų izoliuotos kolonijos.
Principas
Agaro plokštelėje yra terpė, kurioje gausu maistinių medžiagų, stimuliuojančių mikroorganizmų augimą ir dauginimąsi. Nuotekų sėjimui naudojamas kvadrato ruožavimo metodas, kai visa plokštė padalijama į keturis kvadratus. Pereinant iš vieno kvadrato į kitą, palaipsniui skiedžiama pradinė kultūra visame turimame paviršiuje. Kvadrantas, kuriame pradedate, rodo tankų ir neišsiskiriantį mikrobų augimą, kuris atrodo kaip mikroorganizmų kilimas, o paskutinis - izoliuotas kolonijas.
Medžiagos
Išmetant sėklą reikia maistinių agaro plokščių, inokuliacijos kilpos, bakterijų kultūros, dezinfekuojančio tirpalo, pvz., 10% lizolio, ir Bunseno degiklio. Jums taip pat reikės saugos įrangos, tokios kaip prijuostė, pirštinės ir apsauginiai akiniai. Inkulum strijų formavimui yra pagamintas iš bakterijų kultūros naudojant kilpą ir subraižant maistinių agaro plokšteles. „Bunsen“ degiklis skirtas rankenai liepsnoti griovelių metu. Prieš pradėdami eksperimentą, paviršių nuvalykite dezinfekuojančiu tirpalu.
Metodas
Norėdami pasėti į pirmąjį kvadrantą judėdami pirmyn ir atgal, naudokite nedidelį kiekį sėjimo. Uždekite rankeną ir leiskite jai atvėsti, paliesdami ją neužsėta agaro plokštelės dalimi. Palieskite jį prie vieno ką tik pasėtos srities galo ir ištiesite jį iš ten į antrąjį kvadrantą. Liepsnokite ir vėl atvėsinkite kilpą, o iš antrosios srities dirbkite trečią kvadrantą. Pakartokite tą patį procesą su ketvirtuoju kvadratu.
