Turinys
Šaltuoju alkoholiu naudojamas DNR atskyrimas nuo vandeninių tirpalų, leidžiantis jį valyti vėlesniems genetiniams tyrimams. Alkoholio įdėjimas į tirpalą, turintį DNR, yra paprastas būdas jį išvalyti žemesnėje temperatūroje ir sulėtinti fermentus, kurie ją sugadina, suteikdami geresnius ekstrakcijos rezultatus.
Ląstelių sienų lūžimas
Išgryninimo procedūros grynos DNR gavimo metu turi atsikratyti visų molekulinių ir cheminių audinių komponentų, iš kurių DNR yra išskirta. Pirmieji žingsniai apima ląstelių sienelių sunaikinimą. Tai gali būti padaryta įvairiais cheminiais veiksniais, kurie yra šarminiai ląstelių membranoms, bet nepažeis DNR. Ląstelės taip pat gali būti apdorojamos ultragarsu, homogenizuotos arba sumalamos, kad sunaikintų membranas.
Lipidų šalinimas
Sunaikinus ląstelių sienas, pridedama ploviklio, norint atsikratyti ląstelių membranų sudarančių riebalų ir aliejų. Plovikliai sukelia tirpalo aliejų ir riebalų ištirpinimą.
Baltymų pašalinimas
Baltymai ir fermentai gali būti virškinami pridedant tirpalui proteazės. Proteazės suskaido baltymus į mažus peptidus ir aminorūgštis.
Nusodinantis DNR
Į šaltojo šalto alkoholio pridėjimą į tirpalą nusodins ir sumaišys DNR. Genetinę medžiagą galima surinkti centrifuguojant mėginį ir dekantuojant skystąjį sluoksnį. Centrifugos mėgintuvėlio apačioje jis turėtų būti nedidelis nuosėdos.
Valymo DNR
DNR gali būti plaunama pakartotinai suspenduojant šalto alkoholio tirpale ir keletą kartų pakartotinai centrifuguojama, kad gautų labai gryną mėginį. Tipiniai alkoholiai yra etanolis ir izopropanolis. Šis procesas palieka labai gryną mėginį griežtuose bandymuose.
