Turinys

• Instrukcijos

Dalyvaudami aukštesnės pakopos mikrobiologijoje, jūsų mokytojas gali pareikalauti, kad atliktumėte projektą, kuriame turite nustatyti nežinomą bakteriją, atlikdami keletą bandymų. Norint tinkamai identifikuoti šias bakterijas, būtina turėti visą tinkamą laboratorinę įrangą ir žinoti įvairias laboratorines procedūras. Taip pat naudinga turėti bakterijų ir jų laboratorinių tyrimų srautų schemą, kad galėtumėte nustatyti savo bakterijas.

Instrukcijos

Kultūros plokštės leidžia išskirti bakterijas, kad būtų galima lengvai nustatyti jų savybes (Hemera Technologies / Photos.com / Getty Images)

1. Prieš pradedant eksperimentą, atlikite visus bandymus. Tai apima agaro plokščių ir vamzdelių paruošimą, taip pat būtinų rodiklių, pvz., Kovac reagento, paruošimą. Tinkamai pažymėkite visus mėgintuvėlius ir plokšteles, kad jie nebūtų sumaišyti, todėl gaunami klaidingi rezultatai.

2. Sėti savo bakterijas. Tai nustatys bakterijos formą ir spalvą, pvz., Gramteigiamą (purpurinę), gramnegatyvią (raudoną arba rožinę), kokosus (apvalius), spirocetus (spiralę) arba strypus. Norėdami sėti savo bakteriją, jums reikės švaraus peilio, vandens, kristalizuoto violetinio, jodo, baliklio, safranino, sugeriamojo popieriaus, šviesos mikroskopo ir kai kurių popierinių rankšluosčių. Po to, kai praplaukite kilpą, naudokite jį ant lašo vandens lašą. Dar kartą užlenkite kilpą ir tada įpilkite nedidelį kiekį jūsų nežinomų bakterijų į vandens lašą. Kelis kartus pjaukite peilį virš liepsnos, kad bakterijos būtų sausos ir visiškai pritvirtintos prie mentės. Uždenkite jį kristalizuota violetine, palikite vieną minutę ir švelniai nuplaukite. Tada padengti peilį su jodu. Palikite 30 sekundžių, po to nuplaukite. Virš ašmenų padėkite sugeriančio popieriaus gabalėlį, kad pašalintumėte perteklinį vandenį. Tada pilkite baliklį ant ašmenų. Po penkių sekundžių nuplaukite, kad pašalintumėte baliklį. Galiausiai uždenkite peilį su safraninu. Po 40 sekundžių nuplaukite peilį ir švelniai nuvalykite popieriniu rankšluosčiu. Uždėkite lašą aliejaus ant bakterijų vietos ant stiklelio ir žiūrėkite po mikroskopu. Atkreipkite dėmesį į matomų bakterijų formą ir spalvą.

   
   

3. Išbandykite oksidazę savo bakterijose. Tam reikės popieriaus filtro, oksidazės reagento, E. coli, Pseudomonas ir jo nežinomų bakterijų. Šiame tyrime kontroliuojami E. coli ir Pseudomonas. Šiam tyrimui jūsų bakterija turi būti senesnė nei 24 valandos. Flambuokite rankenėlę ir įdėkite nedidelį kiekį bakterijų ant popieriaus filtro. Įpilkite vieną lašą reagento oksidazės į kiekvieną bakteriją. Po 10 sekundžių pažymėkite kiekvienos bakterijos spalvą. E. coli rezultatas bus teigiamas, o Pseudomonas rezultatas bus neigiamas. Bakterijos, teigiamos citochromo oksidazės fermentui, taps raudonos, o neigiamos bakterijos nekeičia spalvos.

4. Vandenilio sulfido (SIM) bandymas. Patraukite rankenėlę ir naudokite ją paimti bakterijas iš plokštės. Įdėkite SIM mėgintuvėlį su bakterijomis ir padenkite. Palikite šį mėgintuvėlį orkaitėje 18–24 valandas 37 ° C temperatūroje. Nustatykite, ar jūsų bakterija yra mobili (ar flagellum). Jei yra augimas ir drumstumas toli nuo ten, kur jūs užkrėsti bakterijas, jis yra mobilus. Po to į vamzdelį įdėkite du lašus Kovac reagento. Jei jo spalva pasikeičia į raudoną arba rausvą, jo bakterija yra teigiama ir turi triptofano, todėl yra indolo gamintojas. Jei vamzdis tampa juodas, jo bakterijos gamina vandenilio sulfidą.

   
   

5. Atlikite „Simmon citrate“ testą. Įdėkite bakterijas į du mėgintuvėlius su Simmono agaru. Palikite juos orkaitėje 18–24 valandas 37 ° C temperatūroje. Agaras iš pradžių yra žalias, tačiau, jei jūsų bakterijos naudoja kaip citratą kaip anglies šaltinį, spalva pasikeis nuo žalios iki mėlynos spalvos. Mėlyna yra teigiamas rezultatas. Jei mėgintuvėliai lieka žalūs, jų bakterijos yra neigiamos, nes citratas naudojamas kaip vienas anglies šaltinis.

6. Atlikite metilo raudoną bandymą (MRVP). Šiam bandymui reikia dviejų mėgintuvėlių, kuriuose yra peptono, buferių ir dekstrozės (arba gliukozės) tirpalo. Kiekvieną mėgintuvėlį suleiskite nežinomomis bakterijomis ir grįžkite į viryklę 18–24 valandas 37 ° C temperatūroje. Kai paruoštas, į mėgintuvėlį įpilkite trijų lašų metilo raudono. Tai bus jūsų MR vamzdis. Jei mėgintuvėlis pasikeičia nuo geltonos iki raudonos, jo bakterija yra teigiama ir fermentacijos metu naudoja mišrią rūgšties kelią (gaminamos pieno, acto ir skruzdžių rūgštys). Antrajame mėgintuvėlyje pridėkite tris lašus VP reagento. Jei mėgintuvėlis tampa raudonas, bakterijos yra teigiamos, nes susidaro diacetilas, fermentacijos produktas. Jei mėgintuvėlis tampa rudas, jūsų bakterija yra neigiama.

7. Suraskite savo bakterijas, pažymėdami teigiamus ir neigiamus srauto schemos rezultatus.