Turinys
Didelio efektyvumo skysčių chromatografija (HPLC) yra priemonė, naudojama medžiagoms atskirti nuo mišinio. Tam tikrų cheminių medžiagų atskyrimas ir identifikavimas vyksta daugiausia sistemos chromatografijos kolonėlėje. CLAE yra daugybė stulpelių tipų ir kiekvienas naudojamas konkrečiam analizės tipui. C18 stulpelis yra stipriausias paprastai naudojamas nepolinis. Nuolat vartojant ilgesnį laiką, tirpiklio srautas per jį sumažėja, o analizės laikas pailgėja. Kita analizės laiko sumažėjimo priežastis yra mėginių, kurie kolonos medžiagoje palieka nedidelį kiekį chemikalų, sumažinant galimybę juos atskirti. Jo paviršių galima atkurti apdorojant medžiagą specialių tirpiklių serija, kad būtų galima išvalyti nuo likusių mėginių ir atgaivinti atraminę medžiagą.
1 žingsnis
Stulpelį C18 pašalinkite iš srauto krypties ir padėkite priešinga kryptimi. Tirpiklio išleidimas atgal palengvins kaupimosi efektą, atsirandantį laikui bėgant. Reikia stengtis, kad kolonos gale neliktų per daug sukauptos medžiagos. Kai kurios gamyklos naudoja didesnį tinklelį viršuje, kad kai srautas keičiasi kryptimi, tinklelis yra žemiau esančioje padėtyje. Šis atstatymo būdas vadinamas srauto persukimu. Kad kaupimasis nepatektų į sistemos detektorių ir galbūt nesukeltų kliūčių, leiskite jam veikti be prijungto detektoriaus ir nukreipkite srautą iš kolonos į šalinimą.
2 žingsnis
Tirpiklio ištraukimo mėgintuvėlis dedamas į tirpiklių seriją, kad bet koks kolonoje likęs junginys būtų išgautas priešinga kryptimi. Šie tirpikliai skiriasi savo hidrofilinėmis savybėmis. Keičiant juos, jūs išgausite vienodai įvairaus hidrofilinio pobūdžio junginius. Panaudokite po 50 ml kiekvieno iš šių tirpiklių: vandens (jei naudojate buferį), metanolio, izopropanolio, dichlormetano, heksano, dichlormetano ir izopropanolio.
3 žingsnis
Kolonėlę pakeiskite teisinga kryptimi ir priverkite per ją tekėti tirpiklį. Prieš tęsdami naudokite mažiausiai 75 ml. Išbandykite modelį, kurį naudojote, kai jis buvo naujas, ir patikrinkite rezultatus. Atkreipkite dėmesį, kai pasiekiate maksimalius sulaikymo taškus ir bendrą analizės laiką. Laipsnis, kuriuo šie atributai sutampa su pradiniu testu, kai jis dar buvo naujas, parodys stulpelio atkūrimo laipsnį. Jei rezultatai netenkina, stulpelį pakeiskite nauju ir išmeskite seną.
