Turinys

• Instrukcijos
• Stulpelio atkūrimas
• Kaip
• Pastaba
• Ką reikia

Didelio našumo skysčių chromatografija (HPLC) yra įprastas laboratorinių tyrimų metodas, kuriame mėginys yra atskiriamas į cheminius komponentus, kai jis eina per kolonėlę. Ši kolonėlė užpildyta poringa medžiaga, paprastai silikageliu. Standartinė atvirkštinės fazės kolona, ​​kaip ir C8, kartais gali užsikimšti arba užteršti. Šiuos stulpelius galima gauti naudojant labai paprastus metodus.

Instrukcijos

Tinkamas tirpiklis gali atgauti nešvarią kolonėlę (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Stulpelio atkūrimas

1. Išjunkite stulpelį ir pakeiskite jo padėtį, kad judanti fazė patektų per tai, kas paprastai yra stulpelio išvestis. Pritvirtinkite lizdą prie kito stulpelio galo (kuris buvo pradinis įrašas) ir leiskite jam nutekėti.

2. Sumažinkite tirpiklių seriją mažėjančio poliškumo tvarka. Rekomenduojama pagrindinė serija yra pradėti nuo metanolio, tada pereiti prie acetonitrilo, tada acetonitrilo / izopropanolio (75:25), izopropanolio, metileno chlorido ir heksano. Jei judanti fazė, kuri buvo kolonėlėje, buvo absorbuojanti, rekomenduojama ištraukti vandenį prieš metanolį. Vieno iki dviejų mililitrų per minutę srautas yra pakankamas, o maždaug dešimt tūrio kolonų kiekvienam tirpikliui turėtų būti pumpuojami. Tūrio stulpelis yra vidinė kolonos erdvė ir apskaičiuojama (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), kur DI yra kolonėlės vidinis skersmuo ir L yra ilgis.

   
   

3. Į kolonėlę įpilkite dar 10 tūrio izopropanolio, kad preparatas būtų paruoštas naudoti su pradine mobilia faze. Jei pradinė judanti fazė buvo sušvelninta, taip pat siurbkite vandenį per kolonėlę po izopropanolio, prieš grįždami į pradinę judančią fazę.

4. Išjunkite kolonėlę, pasukite ją atgal ir vėl įjunkite, kad jis būtų pradinėje padėtyje (taip, kad judama fazė patektų į dešinę stulpelio pusę). Prijunkite garsiakalbio išėjimą į detektorių.

Kaip

• Jei šis procesas kolonėlės nėra kruopščiai išvalytas, gali būti naudojamas 50:50 dimetilo sulfoksido (DMSO) ir dimetilformamido (DMF) mišinys. Baltymų ir metalų jonų likučiai gali reikalauti kitų tipų tirpiklių, tokių kaip jonų taupantys reagentai arba etileno diamino tetraacto rūgšties (EDTA) tirpalas.

Pastaba

• Kai kuriuose prietaisuose stuburas turi grubų metalinį sietą kaip įleidimo angą. Šiuo atveju stulpelio grąžinimas leis stacionariai fazei palikti stulpelį, ir tai nerekomenduojama. Jei nesate tikri, pasitarkite su pardavėju.
• Šiame procese naudojamas tirpiklis yra potencialiai toksiškas nurijus ir įkvėpus. Naudojant įprastas laboratorines atsargumo priemones.

Ką reikia

• HPLC įrenginys
• Vanduo
• Metanolis
• Acetonitrilas
• Izopropanolis
• Metileno chloridas
• Heksanas